ATCC細胞操作指南

收到細胞的注意事項

　　凍存的ATCC細胞株和雜交瘤細胞株在運送過程中使用干冰保持低溫。收到凍存細胞后，可以立即解凍復(fù)蘇，去除二甲基亞砜（DMSO）后進行細胞培養(yǎng)。如果不立即復(fù)蘇培養(yǎng)細胞，必須將細胞凍存管放置于液氮罐存儲

。請不要將細胞存儲在-130℃以上的溫度。如果溫度不夠低，達不到-130℃，細胞活力會迅速下降。

　　產(chǎn)品說明書和質(zhì)檢報告（COA）

　　ATCC每個細胞株都有一份產(chǎn)品說明書（product sheet），其中包含細胞株的信息和詳細的操作指南。細胞株的所有詳細介紹可以在ATCC網(wǎng)站找到，產(chǎn)品說明書和COA也可以從ATCC網(wǎng)站下載。

　　凍存細胞的復(fù)蘇和培養(yǎng)

　　1.先準(zhǔn)備好細胞培養(yǎng)皿或細胞培養(yǎng)瓶，及產(chǎn)品說明推薦的相應(yīng)細胞培養(yǎng)基。并在37℃水浴中預(yù)先溫?zé)峒毎囵B(yǎng)基。

　　2.小心取出裝有細胞的凍存管，保持管蓋擰緊，將凍存管蓋以下的部分置于37℃水浴中并輕微的攪拌以幫助解凍。解凍過程應(yīng)該盡快，大約短于2分鐘或待最后一塊小冰晶體剛?cè)诨?，就?yīng)將細胞凍存管取出水浴。

　　3.在從水浴中取出的細胞凍存管表面噴灑70%乙醇配制的消毒劑，用無菌紙巾或紗布試干。之后的操作步驟都應(yīng)該遵循在無菌條件下生物安全柜中嚴格操作。

　　4.小心擰開凍存管的頂部，將管內(nèi)容物用1ml移液槍轉(zhuǎn)移到含9毫升培養(yǎng)基的無菌離心管中。離心5到7分鐘(125×g),小心吸去上清液以去除抗凍劑(二甲基亞砜)，避免丟失細胞沉淀。

將細胞沉淀重懸于配好的培養(yǎng)基中

。將細胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)容器，輕輕搖晃使細胞均勻的分布。

生長較慢的細胞株可重懸于5-8ml培養(yǎng)基并轉(zhuǎn)移到T25培養(yǎng)瓶。生長較快的細胞株可重懸于12-20ml培養(yǎng)基并轉(zhuǎn)移到T75培養(yǎng)瓶。ATCC網(wǎng)站有各個細胞株的具體生長狀況及培養(yǎng)方法記載。

　　5.將細胞培養(yǎng)容器置于細胞培養(yǎng)箱，在溫度37℃,二氧化碳濃度5%的培養(yǎng)條件下進行孵育。細胞培養(yǎng)24小時后應(yīng)在顯微鏡下觀察細胞形態(tài)和生長狀況。

　　為了確保細胞活力、遺傳基因型穩(wěn)定和表型的穩(wěn)定，細胞株的培養(yǎng)需要保持在對數(shù)期。這意味著需要定期對細胞進行傳代。并且注意在細胞進入生長平臺期之前，

即單層細胞100%匯合長滿前或懸浮細胞達到其推薦的最大細胞密度之前，要進行細胞傳代。監(jiān)測細胞生長和繪制每個細胞株的生長曲線都有助于確定細胞株的生長特性。