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DNA提取試劑盒的操作方法

更新時(shí)間:2025-03-07      點(diǎn)擊次數(shù):777

    全套操作約需1小時(shí),分勻漿、細(xì)胞裂解、除蛋白、DNA純化等步驟,詳細(xì)說明如下。勻漿和細(xì)胞裂解:使用不同的實(shí)驗(yàn)材料需采用不同的勻漿步驟,具體說明如下:【從動(dòng)物組織中提取基因組DNA】使用研缽進(jìn)行勻漿時(shí):

① 取1~100 mg的動(dòng)物組織或人組織移入冰浴預(yù)冷的研缽中,快速用力展研成勻漿。注)下列組織請(qǐng)加液氮研磨至粉末狀。A.富含DNA酶的胰臟、脾臟、胸腺、淋巴等組織。B.富含膠原蛋白的皮膚、肌腱等組織。C.富含角質(zhì)蛋白的組織或堅(jiān)硬的組織(如骨骼)等。

② 加入650 μl的Solution A和0.9 μl的RNase A1,溫和研磨30秒鐘。注)使用上述①-注)的實(shí)驗(yàn)材料時(shí),請(qǐng)?jiān)诩尤隨olution A及RNase A1后,將研缽置于65℃水浴上研磨1分鐘。

③ 收集650 μl研磨好的組織勻漿液移至Collection Tube中。如果勻漿體積不足650 μl,請(qǐng)補(bǔ)充Solution A至650 μl,65℃保溫5分鐘。

使用研磨棒進(jìn)行勻漿時(shí):

① 取1~100 mg的動(dòng)物組織或人組織移入冰浴預(yù)冷的Collection Tube 中,用研磨棒快速研磨成糊狀。

② 加入350 μl的Solution A和0.9 μl的RNase A1后用研磨棒快速研磨成勻漿。

③ 加入350 μl的Solution A將研磨棒上的勻漿沖入Collection Tube中,充分振蕩混合后,65℃保溫5分鐘。

【從植物材料或植物培養(yǎng)細(xì)胞中提取基因組DNA】

① 按下表稱取適量的新鮮植物材料(如選用的是冷凍干燥植物材料,則用量減半),剪成小塊放入研缽中,加入液氮,待樣品冷凍后快速、用力研磨至粉末狀。研磨時(shí)應(yīng)間斷加入液氮以防止材料融化。植物材料種類植物材料使用量*植物花、葉片10~100 mg植物莖60~240 mg植物根80~240 mg植物種子80~240 mg* 如選取植物的根、種子等樣品時(shí),因其基因組DNA含量很低,需使用超過表格中所示的參數(shù)用量,此時(shí)請(qǐng)分兩管進(jìn)行步驟1~6的實(shí)驗(yàn)操作,在步驟7的操作中再將各管溶液分次加入至同一Spin Column中過濾,使各管的基因組DNA結(jié)合到同一個(gè)Spin Column上。如從培養(yǎng)的植物細(xì)胞中提取基因組DNA,請(qǐng)離心收集2×103~1×107的培養(yǎng)植物細(xì)胞,加入150 μl水充分懸浮細(xì)胞后移入研缽中,加入液氮后快速、用力研磨至粉末狀。注)樣品研磨應(yīng)充分,否則將會(huì)嚴(yán)重影響基因組DNA的收率。

② 將研缽移至65℃水浴,當(dāng)樣品粉末剛開始融化時(shí),向研缽中加入700 μl的Solution A和1.2 μl的RNase A1,用力碾磨30秒。

③ 收集650 μl研磨好的組織勻漿移至Collection Tube中。如勻漿體積不足650 μl,請(qǐng)補(bǔ)充Solution A至650 μl。65℃保溫15分鐘。注)處理富含纖維的根/莖等植物材料或富含淀粉、蛋白質(zhì)的種子等時(shí),可延長水浴時(shí)間至60分鐘。

【從全血中提取基因組DNA】

① 取10~250 μl的全血(含抗凝劑)加入至Collection Tube中。

② 加入500 μl的Solution A。

③ 加入1 μl的RNase A1,激烈振蕩15秒鐘后,冰浴5分鐘。注) 人與動(dòng)物的抗凝全血的一次處理量為≤250 μl;禽類、兩棲類的抗凝全血的一次處理量為≤10 μl。

【從培養(yǎng)細(xì)胞中提取基因組DNA】三.使用懸浮培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞時(shí):

① 使用Collection Tube收集1×105~1.5×107的細(xì)胞懸浮液,5,000 rpm離心5分鐘,棄上清(細(xì)胞培養(yǎng)液)。

② 加入150 μl的滅菌蒸餾水或PBS懸浮細(xì)胞。

③ 加入500 μl的Solution A和0.8 μl的RNase A1,激烈振蕩15秒鐘,然后室溫靜置1分鐘。

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